精子与卵子的质量决定了胚胎的质量，随着生殖医学的发展，精子对胚胎质量的影响越来越多地被临床医师所重视，在IVF实验室中如何筛选出优质的精子，使卵子受精获得发育潜能好的胚胎是胚胎实验室技术人员不断探索的主题。精液处理在室温中进行，目的是减少或者去除精浆内前列腺素、死亡和裂解精子、免疫活性细胞、抗精子抗体、细菌与碎片，从而获得正常形态、活力较好的精子，促进精子获能，以达到符合体外受精要求的活动精子密度，提高精子的受精能力。常用的精液处理方法有简单洗涤法、上游法、密度梯度离心法。处理方法主要根据患者精子的密度和活率的具体情况而定。处理过程（试剂、每步时间、操作者等信息），处理前后精子密度、活率应该记录备案。

（一）简易洗涤法

精浆中的活性氧、前列腺液或白细胞增多的精囊液均导致精子活动力的减弱。在少精子症、弱精子症中，通过离心的过程可使得精子脱离精浆不良环境，分离出活力好、正常的精子以备体外受精使用。

1.试剂

精子洗涤液：在使用前20分钟放入37℃恒温箱中预热。

受精培养液：置入37℃、5%CO ₂ 的培养箱过夜平衡。

2.处理步骤

（1）精液标本充分液化并混匀。

（2）将2ml精子洗涤液加入精液中，再次混匀。

（3）将已稀释的精液移入15m l离心管内，300g离心10分钟，弃上清液（该步骤可重复1～2遍）。

（4）将沉淀加入0.5～1ml受精培养液混匀，置室温备用。

（二）上游法

利用活动的精子具有向培养液中上游的能力，从而将活力好的精子与精浆中死精子、凝集的精子、白细胞及杂质分离，适用于精液常规正常或轻度的少精子症、弱精子症。

1.试剂

（1）精子洗涤液：

在使用前20分钟放入37℃恒温箱中预热。

（2）受精培养液：

置入37℃、5%CO ₂ 的培养箱过夜平衡。

2.处理步骤

（1）按1∶1比例在15ml离心管内加入液化精液及精子洗涤液，300g离心10分钟，弃上清液。

（2）加入2ml受精培养液混匀，300g离心10分钟，弃上清液。

（3）沿离心管壁缓慢加入0.5～1ml受精培养液。

（4）离心管向上或倾斜60度角在37℃培养30～60分钟，吸出上层液体，转移至另一支试管中。

（三）密度梯度离心法

密度梯度离心法利用不同梯度亲水性硅烷包裹的氧化硅胶体溶液，将精子和各种细胞成分在离心作用下分离，从精液中筛选出正常精子。密度梯度离心法可用于轻及中度的少精子症、弱精子症和畸形精子症精液的处理，对于附睾手术取出的精液标本或严重的少精子症，用0.5m l的微量梯度离心也能获得较好的活动精子。

1.试剂

（1）90%密度梯度离心液：

在使用前20分钟放入37℃恒温箱中预热。45%密度梯度离心液：在使用前20分钟放入37℃恒温箱中预热。

（2）受精培养液：

置入37℃、5%CO ₂ 的培养箱过夜平衡。

2.处理步骤

（1）依次将1ml 90%密度梯度液加入15ml离心管下，然后加1ml 45%密度梯度液，注意不同浓度梯度液间的界面清晰。

（2）精液完全液化，充分混匀后用巴斯德吸管吸取1ml精液加在45%密度梯度液上方。

（3）300g离心15～20分钟，弃离心管上方的精浆与密度梯度液。

（4）吸取沉淀转移至装有2ml精子洗涤液的离心管内混匀，200g离心10分钟，弃上清液，留沉淀。

（5）新巴斯德吸管加入2m l受精培养液再次洗涤1次，200g离心10分钟，弃上清液。

（6）将沉淀重新吸取重悬于1ml受精培养液，置入37℃、5%CO ₂ 的培养箱备用，并分析精子浓度与活动力。

（四）特殊来源精子的处理

无精子症（azoospermia）根据病因分为梗阻性无精子症（obstructive azoospermia，OA）和非梗阻性无精子症（non-obstructive azoospermia，NOA）。目前外科取精术通过经皮附睾穿刺精子抽吸术（percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA）经皮睾丸穿刺抽吸术（testicular sperm aspiration，TESA）、睾丸切开取精术（testicular sperm extraction，TESE）及睾丸显微取精术（microsurgical testicular sperm extraction，micro-TESE）。从附睾或睾丸组织中获取正常精子再行卵细胞质内单精子注射术，无精子症患者获得生物学后代的可能。

1.附睾精子处理步骤

（1）微量密度梯度离心法：

将附睾抽吸液与0.5ml精子洗涤液混悬液轻置于用0.5ml的90%密度梯度液和45%密度梯度液上，余步骤同密度梯度离心法。

（2）直接离心法：

将1ml附睾抽吸液与精子洗涤液混悬液置于15ml离心管内，300g离心5分钟，弃上清液，在沉淀中加入0.2ml受精培养液，置入室温备用。

2.睾丸取精处理步骤

（1）将睾丸组织用1ml无菌空针针头将其划碎，在显微镜下观察精子情况。

（2）将磨碎的组织置于含2ml受精培养液的15ml离心管内，在37℃、5%CO ₂ 的培养箱内孵化。

（3）使用前用吸管反复吹吸混匀，待大块组织沉淀于试管底部后，取上清液于另一15ml离心管内，200g离心10分钟。

（4）弃上清液，将底部沉淀混匀，加入含0.3～0.5ml受精培养液的试管中，置于37℃、5%CO ₂ 的培养箱备用。

3.逆行性射精处理步骤

（1）取精前禁欲3～5天，口服碳酸氢钠片，每次2g，每天3次。

（2）取精前不完全排空膀胱，手淫取精，精液排出后，立即排尿液至大口径容器中。

（3）将所有尿液300g离心10分钟，弃上清液，留沉淀。

（4）根据沉淀中精子的密度，再进行密度梯度离心法或直接离心法。