咨询热线： 186-5313-3475
咨询热线： 186-5313-3475
咨询热线： 186-5313-3475 
1.在取卵当日，明确告知患者如何收集精子标本。精子标本的获取方法详见第四章第三节。
2.精子标本收集后1小时内分析并处理。
精液分析按照《WHO人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）进行。
精液主要由精囊腺和前列腺的分泌液构成，包括少量来自尿道球腺和附睾分泌的液体。由于要计算精液中的精子总数和非精子细胞，所以，精确测量精液体积是任何精液评价的基础。最好通过称重收集量器中的精液来测量精液体积。
1.用一个预先称重、干净、处理过的容器收集精液。
2.称重盛有精液的容器。
3.减去容器的重量。
4.由精液的重量计算出精液体积（精液密度的变化范围在1.043～1.102g/ml）。精液体积也可以直接测量。
5.将精液标本直接采集到一个改良的广口带刻度玻璃量杯中。
6.直接从刻度上读取精液体积（精确到0.1ml）。
精液射到收集容器后很快呈现典型的半固体凝胶的团块。通常在室温下几分钟内，精液开始液化（变得稀薄），此时精液中可见异质性混合团块。随着继续液化，精液变得更加均质和十分稀薄，在液化最后阶段仅存少量小凝团。在室温下，通常在15分钟内精液标本完全液化，很少超过60分钟或更长时间。如果60分钟仍未完全液化，应作记录。在家中或使用避孕套收集精液标本，当将标本送到实验室时，一般已经液化。
正常液化的精液标本可能含有不液化的胶冻状颗粒（凝胶状团块），这不表明任何临床意义。黏液丝的存在可能干扰精液分析。
精液液化后，通过轻轻地将精液吸入1支广口径（直径约1.5mm）一次性的塑料吸液管，评估标本的黏稠度，使精液借助重力滴下，观察任何拉丝的长度。正常精液形成不连续的小滴从吸液管口滴下。如果黏稠度异常，液滴会形成超过2cm的拉丝。
另一种方法是，将一玻璃棒插入标本，提起玻璃棒，观察拉丝长度来评估标本的黏稠度。当拉丝长度超过2cm时，应记录为不正常的黏稠度。
与不完全液化的标本相比，黏稠的精液标本呈现均质黏性，并且其黏稠度不随时间而变化。通过标本的弹性可以识别高黏稠度，当尝试使用吸液管吸取高黏稠度标本时，它会紧紧黏住吸液管。
正常液化精液标本呈现均质性、灰白色的外观。如果精子浓度非常低，精液可显得透明些；精液颜色也可以不同，例如：有红细胞时（血精）精液呈红褐色，黄疸患者的精液和服用维生素或药物者的精液可呈黄色。
精液pH反映了不同附性腺分泌液pH之间的平衡，主要是碱性的精囊腺分泌液和酸性的前列腺分泌液之间的平衡。pH应在液化后的同一时间测量，最好在30分钟后，但无论如何要在射精后1小时内测量，因为精液pH会受射精后精液中CO 2 逸出的影响。对于正常精液标本，应该使用测量范围在6.0～10.0的pH试纸。
1.充分混匀精液标本。
2.在pH试纸上均匀地涂上1滴精液。
3.等待浸溃区的颜色变得均匀（＜30秒）。
4.与标准条带进行颜色对比，读出pH。
不活动精子之间、活动精子与黏液丝、非精子细胞或细胞碎片之间黏附在一起，为非特异性聚集（图5-3），这种情况应如实记录。
图5-3 精子聚集
a：精子与上皮细胞；b：精子与细胞碎片；c、d：精子与精子的聚集
精子凝集特指活动精子以头对头、尾对尾或混合型相互黏附在一起的现象。精子经常呈现活跃的快速摆动方式，但是有时精子凝集太严重，以致其活动受制约。应该记录所有活动精子通过头、尾、中段黏附在一起的情况。
应当记录主要的凝集类型［反映凝集的程度（1～4级）和黏附部位（A～E级）］：
每个凝集＜10个精子，有很多自由活动精子。
每个凝集＜10～50个精子，存在自由活动精子。
每个凝集＞50个精子，仍有一些自由活动精子。
所有的精子凝集，数个凝集又粘连在一起。
精子的前向运动情况与受孕有密切的关联。在《WHO人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）中，将精子活动力分为前向运动（progressive motility，PR）、非前向运动（nonprogressivemotility，NP）、不活动（immotility，IM），而不再沿用以往的将精子活动力分为a、b、c、d级的分类方法，这是新版手册中的一个重要修订。可采用带有网格的目镜，以更好地评估精子活动力，评估过程中所检测的区域应距离盖玻片边缘至少5mm以上。应在室温或带有加热37℃载物台的显微镜下进行精子活动力评估，由于精子活动力与环境温度密切相关，最好将台面温度保持恒定在37℃。要准确地评估精子活动力，应将精液充分混匀后，重复取样2次分别检测，先仔细观察网格区计数前向运动精子，接下来是在相同的网格内的非前向运动精子，最后是不活动的精子。每个样本至少系统地观察5个视野，分析的精子应＞200个。2次分析结果之间的差异应在95%可信区间内，如果两个样本之间的差异过大，则应重新混匀标本后重复取样检查。《WHO人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）将PR≥32%、（PR+NP）≥40%作为精子活动力的参考值下限，低于此下限时受孕的机会减低。
使用苯胺黑一步染色技术，可以提高背景和与精子头之间的对比度，使精子头更易辨别。也可以保存玻片用于再次评估和作为质量控制用途。
作为染料拒染法的替代试验，精子低渗膨胀试验（hypo-osmotic swelling，HOS）可以用来评估精子的存活率。当必须避免精子染色的时候，这种方法是有用的，例如，为ICSI选择精子的时候。膜完整的精子在低渗溶液中5分钟内发生膨胀，在30分钟之内所有尾部的形状是稳定的。
因此，使用该试验作为常规的诊断，孵育30分钟。但是当精子处理用于治疗用途时，孵育5分钟。
低渗膨胀试验的参考值与伊红试验的参考值相近。精子存活率（膜完整的精子）的参考值下限是58%（第5个百分位数，95%可信区间为55～63）。
每次射精的精子总数和精子浓度与妊娠时间和妊娠率存在联系，并且可以预测受孕。精子总数与生殖结局相关的更多数据已被认可。
精液的精子总数可以通过精液评估中测定的精子浓度来计算。对于正常射精，当男性输精管道是畅通的且禁欲时间短的时候，精液中精子总数与睾丸体积相关，因此精子总数可以衡量睾丸产生精子的能力和男性输精管道畅通的程度。精液中精子浓度与受精率和妊娠率相关，精子浓度受精囊腺和前列腺分泌液量的影响，不是衡重睾丸功能的特异性指标。
精子浓度测定方法：
1.将充分混匀、未稀释的液化精液滴加在载玻片上，盖上盖玻片进行检查，确定合适的稀释度和使用合适的计数板。这是评估精子活力常用的湿片制备程序。
2.混匀精液，准备含有固定液的稀释液。
3.在血细胞计数板的计数池上加样，在一个湿盒中使精子沉降。
4.在10～15分钟内评估精液样本（过长时间，水分蒸发后对计数池内精子的位置会有显著影响）。
5.每份重复样本计数至少200个精子。
6.比较两份重复样本的数值，看其差异的接近程度是否可以接受。如果可以接受，则计算数据；如果不能接受，制备新的稀释样本。
7.计算每毫升精液中的精子浓度。
8.计算每次射精的精子总数。
人类精子形态的多样性造成精子形态评估非常困难，观察女性生殖道（尤其是性交后宫颈黏液中）的精子或从透明带表面回收的精子有助于定义具备潜在受精能力精子的外观。精子形态分析的关键是评估正常形态的精子，计算其百分比，因为只有正常形态的精子才有临床意义。对各类畸形精子也应进行详细分析，有特殊情况还应作记录。
精子包括头、颈、中段、主段和末段。光学显微镜下难以观察精子末段，因此可以认为精子由头（头和颈）和尾（中段和主段）组成。只有头和尾都正常的精子才认为是正常的，所有处于临界状态的精子均应认为异常。精子头外形应为光滑、轮廓规则的椭圆形，顶体区清晰，占头部的40%～70%，顶体区没有大空泡，小空泡不超过2个，空泡大小不超过头部的20%，顶体后区不含任何空泡。中段细长、规则，长度与头部大约相等，主轴与头部长轴在同一直线上，残留胞质不超过头部大小的1/3。主段均一，比中段细，长约45m，相当于头部长度的10倍左右，没有锐利的折角，如彩图5-4所示。
图5-4 正常精子形态学评估
人类精液标本中含有各种各样畸形的精子。精子异常发生和一些附睾的病理改变常常与畸形精子百分率升高有关联，精子的形态缺陷通常是多重的，畸形精子一般都会导致较低的受精潜能，这取决于畸形的类型，也可能有异常的DNA形态缺陷常伴有DNA碎片的增加、染色体结构异常、不成熟染色质和非整倍体。虽然也考虑精子尾（中段和主段），但是头部的形状更为重要，应注意下列精子缺陷的类型（图5-5）。
图5-5 异常精子的形态学评估
大头、小头、锥形头、梨形头、圆头、不定型头、有空泡的头（超过2个空泡，或者未染色的空泡区域占头部的20%以上）、顶体后区有空泡、顶体区过小或过大（小于头部的40%，或大于头部的70%）、双头，或上述缺陷的任何组合。颈部和中段的缺陷：中段非对称地接在头部、粗的或不规则、锐角弯曲、异常细的中段，或上述缺陷的任何组合。
短尾、多尾、断尾，发卡形平滑弯曲、锐角弯曲、宽度不规则、卷曲，或上述缺陷的任何组合。
这是精子异常发生过程产生的异常精子所伴有的，这些异常精子的特点是含有大量不规则已染色的细胞质，胞质的大小超过精子头部的1/3，通常同时有中段缺陷，这种异常的过量胞质不应该被认为是胞质小滴。
